求大批量提取dna的簡(jiǎn)便方法，最近實(shí)驗(yàn)室要對(duì)轉(zhuǎn)基因的材料進(jìn)行pcr檢測(cè)，估計(jì)要提取數(shù)以千計(jì)的水稻葉片dna。實(shí)驗(yàn)室一直用ctab法。因?yàn)橹挥糜趐cr檢測(cè)，dna的量和質(zhì)量要求都不高，請(qǐng)問(wèn)各位同學(xué)有沒(méi)有簡(jiǎn)便快捷的提dna方法？
pcr的時(shí)候誤加了pbs有影響嗎？
提供一個(gè)方法，我最近一直用這個(gè)方法提取擬南芥dna用于pcr，效果很好，方便快捷。見(jiàn)文獻(xiàn)
a simple and rapid method for the preparation of plant genomic dna for pcr analysis
k.edwards, c.johnstone and c.thompson
nucleic acids research, vol. 19, no. 6 1349
實(shí)驗(yàn)室提擬南芥dna，edards溶液簡(jiǎn)易法用機(jī)器震蕩完成，如果熟練加努力，一個(gè)人一天能提好幾百個(gè)。
液氮提取啊，收率很高的，而且方便
應(yīng)該是edwards,另外可以用葉片組織直接pcr的，可以自己摸索，也可以向公司購(gòu)買(mǎi)。
我是小白來(lái)學(xué)習(xí)下~寫(xiě)寫(xiě)樓上的幫助
上面這位師兄的這篇文獻(xiàn)所敘述的方法被廣泛應(yīng)用中，實(shí)際操作過(guò)程中，個(gè)人不建議在提取液中加入ctab，那樣可能會(huì)導(dǎo)致dna擴(kuò)增不出來(lái)，具體什么原理，暫時(shí)也還么有搞懂，但實(shí)踐證明不加ctab，提取的水稻dna效果很好。并且耗時(shí)很短。幾千個(gè)的話(huà)，快的話(huà)幾天就搞定了。。
請(qǐng)問(wèn)能說(shuō)說(shuō)你的詳細(xì)步驟嗎？是不是和文獻(xiàn)上的一樣：
用離心管切下葉片，然后用一次性的研磨棒磨碎，加入提取液，漩渦混勻5 s，室溫靜致1小時(shí)。13000 rpm離心1 min，取上清加入適量異丙醇沉淀核酸，13000 rpm離心5 min，干燥沉淀加水溶解。
這兩周我在做race，導(dǎo)師單人匹馬用傳統(tǒng)的ctab法把幾千個(gè)樣都搞掂了....不過(guò)再過(guò)幾個(gè)月又要檢測(cè)晚造的植株了，還是想要試一試簡(jiǎn)便的方法。
你們導(dǎo)師是一位很強(qiáng)悍的人啊，這點(diǎn)上，讓人佩服，作為學(xué)生的我們實(shí)在是感到汗顏。
上面那位前輩的文獻(xiàn)我看了，其實(shí)有些步驟是不一樣的，比如說(shuō)我們添加了一步酒精清洗dna，這樣的dna比不清洗的肯定要好。
但是師兄不知道你提這個(gè)dna干什么用的，有點(diǎn)必須說(shuō)清楚，sds法提取的是微量dna，如果是做定位什么的，這個(gè)方法還是稍顯欠缺的。傳統(tǒng)ctab法自然是有它的道理。
那么下面就說(shuō)說(shuō)一般我們是怎么做的吧。
首先磨碎加入提取液混勻，我們甚至沒(méi)有用到漩渦震蕩儀，靜置一段時(shí)間，具體我還真沒(méi)怎么記是多久，反正一個(gè)小時(shí)以?xún)?nèi)了，然后12000離心2min，吸取上清，加入異丙醇沉淀，靜置兩分鐘，適量混勻。12000離心5min，去除上清，加入75%酒精清洗，離心5min，去酒精，干燥沉淀，加入ddh2o溶解。
我就是核酸提取后，pcr多態(tài)性擴(kuò)增不出條帶（白板），是什么原因呢？用的引物是issr，材料是果樹(shù)類(lèi)蓮霧葉片，體系沒(méi)有問(wèn)題，是讓別人一塊的帶著混樣的，模板量是母液稀釋30倍后加2微升，提取步驟：ctab法，酚-氯仿-異戊醇抽提10min,氯仿-異戊醇抽提10min, 異丙醇沉淀，te溶解，rna酶處理，氯仿-異戊醇抽提10min, 異丙醇沉淀；dd水溶解===這種情況是年后才出現(xiàn)的，以前的時(shí)候沒(méi)有問(wèn)題，已經(jīng)提取了好多次了，有的時(shí)候是剛提取后 就擴(kuò)增條帶很好，然后不到一周就又不行了，搞不明白啊~~
十分感謝。我們提dna只是為篩選轉(zhuǎn)基因的水稻植株，dna的質(zhì)量要求不高。
另再問(wèn)，你是用液氮磨碎樣品的嗎？用的提取液應(yīng)該是和文獻(xiàn)的一樣的吧：200 mm tris hcl ph 7.5, 250 mm nacl, 25 mm edta, 0.5% sds。
同學(xué)你的dna質(zhì)量如何呢？譬如說(shuō)擴(kuò)actin之類(lèi)的正對(duì)照能擴(kuò)出來(lái)么？
正對(duì)照是怎么跑的呢？dna質(zhì)量個(gè)人認(rèn)為還行吧，方法是實(shí)驗(yàn)室傳統(tǒng)方法，以前都沒(méi)問(wèn)題，一直在找原因，頭都大了~·
師兄啊我倒是想幫你分析呀，但是我沒(méi)有實(shí)際用ctab操作過(guò)，都是理論上的知識(shí)，現(xiàn)在也就開(kāi)始做實(shí)驗(yàn)頂天三個(gè)月，積淀還差的遠(yuǎn)，有心無(wú)力。
個(gè)人覺(jué)得吧實(shí)際做實(shí)驗(yàn)的時(shí)候什么情況都能出現(xiàn)。還真說(shuō)不出來(lái)個(gè)所以然。有幾次我更糾結(jié)呢，一個(gè)indel引物次p出來(lái)了，后面四次一次都沒(méi)有p出來(lái)。模板，引物，pcr條件都試過(guò)了，這個(gè)到現(xiàn)在都不知道什么原因。
你說(shuō)有時(shí)候剛提取出來(lái)的擴(kuò)增條帶很好，不到一周就不行了，是不是dna被降解了？一般來(lái)說(shuō)dan放在4度冰箱是可以保存兩個(gè)月的。一般溶解dna喜歡用tris ph 8.0 10mm。要不然師兄你試試吧。。。
水稻的話(huà)是要而且動(dòng)作一定要快，液氮的，不然葉片咋個(gè)弄的碎喲，提取液用1.5%sds吧。感覺(jué)0.5%的話(huà)，稍微有點(diǎn)低。
請(qǐng)問(wèn)一下師姐，要取多少的樣呢？可否用液氮磨碎后，再轉(zhuǎn)移到ep管，再加提取液？
首先答案是肯定的，這樣子弄可以的撒。
但是為什么要這樣做呢？
在液氮磨碎后轉(zhuǎn)移到ep管？你們用研缽磨碎的嗎？
還是說(shuō)你們的樣本很難于磨碎，必須使用這樣的方式才能磨碎。
一般來(lái)說(shuō)禾本科類(lèi)的植物取樣本的量如水稻只需要3~5分之一葉片就足夠了，當(dāng)然這個(gè)也是要根據(jù)你做的實(shí)驗(yàn)的要求來(lái)的。
個(gè)人覺(jué)得如果做水稻這類(lèi)禾本科植物的話(huà)不需要這么麻煩，這樣既浪費(fèi)液氮，樣本的取樣量要求也必較大，中間肯定有損失的撒。其他比如木本植物什么的話(huà)，可以試試
一般都是酚-氯仿抽提法
我提擬南芥用的！要求不高，pcr就好！
這個(gè)提出來(lái)，黑乎乎的一坨！明顯的不是dna啊?。╡dtana2 代替了edta)
話(huà)說(shuō)我也是做擬南芥的哇
用這個(gè)方法簡(jiǎn)單方便，很快的
至于為什么會(huì)黑乎乎一坨我還真沒(méi)遇到過(guò)？關(guān)鍵是你還用的是坨？
難道不是液體？你提出來(lái)是固態(tài)？？？？？
不好意思上面這個(gè)說(shuō)法有問(wèn)題哈，按理來(lái)說(shuō)溶解后的dna應(yīng)該是無(wú)色的吧？
用異丙醇沉淀后，去上清，就是黑乎乎的了！目測(cè)是蛋白，加70%乙醇洗2次~ddh2o溶不了！
這個(gè)要怎么說(shuō)好呢
sds這個(gè)方法大家運(yùn)用的都已經(jīng)很熟悉了
禾本科類(lèi)的植物用這個(gè)方法都很快捷簡(jiǎn)單
現(xiàn)在來(lái)回答生理生態(tài)學(xué)的這位蟲(chóng)友哈，因?yàn)闆](méi)有名字只能這么稱(chēng)呼了
至于我怎么提取的，具體方法請(qǐng)參照前面回帖，這里就不再說(shuō)了
提取液的配方請(qǐng)參照前面的用量，次吸取的上清液應(yīng)該是無(wú)色或者綠色的。說(shuō)是無(wú)色的是因?yàn)槿绻闳犹貏e微量（擬南芥播種后大約20天左右的苗去其葉片）的話(huà)，可能是看不到什么東西的，但dna是能提出來(lái)的。
如果這步么有問(wèn)題，那么加入異丙醇沉淀，在管底可能會(huì)看到白色的沉淀物的。為啥我又要說(shuō)可能呢？是因?yàn)閿M南芥這個(gè)東西基因組本來(lái)就小，樣本再一小，提取出來(lái)的量就可能肉眼不見(jiàn)咯。
如果是水稻的話(huà)，可以看到很明顯的白色沉淀哈~~
如果這樣子還在黑乎乎的話(huà)，就不知道怎么回事了。。。
只能說(shuō)求人品。。。。
我們有植物直接pcr試劑盒，無(wú)需單獨(dú)提取dna,快速、靈敏、特異性強(qiáng)，適用于植物樣品的高通量篩選和檢測(cè)。qq：
請(qǐng)問(wèn)你在析出dna那一步，加入-20度無(wú)水乙醇后放在-20度冰箱中多久啊。放久了會(huì)不會(huì)對(duì)dna有影響啊。
水稻直接丁丁點(diǎn)葉片，想辦法搗爛巴點(diǎn)，加naoh95度煮煮數(shù)分鐘，加點(diǎn)酸中和，上清液就可以去做pcr了