與傳統(tǒng)的動物模型相比,體外的細(xì)胞培養(yǎng)模型相對操作簡便,實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性也相對更高。.自20世紀(jì)50年代以來,胎牛血清作為常用、高效的添加物,在世界范圍內(nèi)被廣泛應(yīng)用于體外細(xì)胞培養(yǎng)。
胎牛血清,是由胎牛血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物,含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機(jī)物等,其組成成份大部分已知,但還有一部分尚不清楚,這些物質(zhì)對促進(jìn)細(xì)胞生長或抑制生長活性是達(dá)到生理平衡的。其中不含細(xì)胞、纖維蛋白和凝血因子。胎牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)方面通常優(yōu)于其他類型的血清。由于胎牛從未接觸過外界,與新生牛和小牛血清相比,抗體含量明顯降低,故抗體與培養(yǎng)細(xì)胞發(fā)生交叉反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)也較低,是理想的細(xì)胞生長補(bǔ)充劑。
近日的一項(xiàng)研究,探究了細(xì)胞培養(yǎng)與胎牛血清的關(guān)系。
該項(xiàng)研究中,無論采用國產(chǎn)還是進(jìn)口的胎牛血清培養(yǎng)sp2/0其細(xì)胞克隆數(shù)、細(xì)胞數(shù)量和細(xì)胞活率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05).這與已有的研究結(jié)果相類似.究其原因可能是sp2/0與mdck同屬細(xì)胞系,部分遺傳物質(zhì)已發(fā)生改變,且?guī)в邪┳兊奶攸c(diǎn),能在體外培養(yǎng)條件下無限制地傳代,對血清的依賴降低,因此能在各類型血清中較好地生長增殖.研究中還發(fā)現(xiàn):進(jìn)口胎牛血清培養(yǎng)的豬胎兒成纖維細(xì)胞,其細(xì)胞克隆數(shù)、細(xì)胞數(shù)量和活率均極顯著高于國產(chǎn)胎牛血清(p<0.01)有科研人員利用不同來源胎牛血清培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)在使用fbs1培養(yǎng)過程中,骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞逐漸死亡,而fbs2培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞不但能很快貼壁和迅速增殖,而且傳代培養(yǎng)后能保持很強(qiáng)的分裂增殖能力.推測可能是因?yàn)樨i胎兒成纖維細(xì)胞與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞屬于原代細(xì)胞,保持了體內(nèi)的生物學(xué)特性.因不同來源胎牛血清,其采集方式與生產(chǎn)加工工藝不同,所含促細(xì)胞生長因子等活性物質(zhì)的組份與比例也有所不同,導(dǎo)致原代細(xì)胞的生長、增殖受血清來源影響較大。
不同來源胎牛血清質(zhì)量差異大,即使同一品牌、同一貨號,因供血動物性別、生理、營養(yǎng)等條件不同,也會存在批次間的差異。該研究利用豬胎兒成纖維細(xì)胞對同一品牌、同一貨號,3個(gè)不同批次的胎牛血清進(jìn)行了測試,結(jié)果顯示:fbs2-1形成的細(xì)胞克隆小,且細(xì)胞克隆數(shù)極顯著低于fbs2-2和fbs2-3(p<0.01);培養(yǎng)10d后,fbs2-1的細(xì)胞數(shù)量和細(xì)胞活率極顯著低于fbs2-2和fbs2-3(p<0.01),雖然fbs2-2的細(xì)胞克隆數(shù)極顯著低于fbs2-3(p<0.01),但是fbs2-2的細(xì)胞克隆大,且細(xì)胞數(shù)量極顯著高
于fbs2-3(p<0.01).該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)篩選出fbs2-2是豬胎兒成纖維細(xì)胞的適宜血清。
由此實(shí)驗(yàn)可以看出,不同細(xì)胞對于胎牛血清的要求不同,不同批次、品牌的胎牛血清培養(yǎng)效果也不盡相同,在選購時(shí),需要盡量選擇可提供試用服務(wù)的品牌,在小范圍內(nèi),對細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)實(shí)驗(yàn),已選擇更符合實(shí)驗(yàn)要求的胎牛血清。