1、1 m tris-hcl (ph7.4, 7.6, 8.0)
組份濃度:1 m tris-hcl
配制量:1 l
配制方法:
1. 稱量121.1 g tris置于1 l燒杯中。
2. 加入約800 ml的去離子水,充分?jǐn)嚢枞芙狻?br>3. 按下表量加入濃鹽酸調(diào)節(jié)所需要的ph值。
ph值 濃hcl
7.4 約70ml
7.6 約60ml
8.0 約42ml
4. 將溶液定容至1 l。
5. 高溫高壓滅菌后,室溫保存。
注意:應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定ph值,因?yàn)閠ris溶液的ph值隨溫度的變化差異很大,溫度每升高1℃,溶液的ph值大約降低0.03個(gè)單位。
2、10×te buffer (ph7.4, 7.6, 8.0)
組份濃度:100 mm tris-hcl, 10 mm edta
配制量:1 l
配制方法:
1. 量取下列溶液,置于1 l燒杯中。
1m tris-h(huán)cl buffer(ph7.4,7.6,8.0) 100ml
500mm edta(ph8.0) 20ml
2. 向燒杯中加入約800 ml的去離子水,均勻混合。
3. 將溶液定容至1 l后,高溫高壓滅菌。
4. 室溫保存。
3、1.5 m tris-hcl (ph8.8)
組份濃度:1.5 m tris-hcl
配制量:1 l
配制方法:
1. 稱量181.7 g tris置于1 l燒杯中。
2. 加入約800 ml的去離子水,充分?jǐn)嚢枞芙狻?br>3. 用濃鹽酸調(diào)節(jié)ph值至8.8。
4. 將溶液定容至1 l。
5. 高溫高壓滅菌后,室溫保存。
注意:應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定ph值,因?yàn)閠ris溶液的ph值隨溫度的變化差異很大,溫度每升高1℃,溶液的ph值大約降低0.03個(gè)單位。
4、3 m 醋酸鈉(ph5.2)
組份濃度:3m 醋酸鈉
配制量:100ml
配制方法:
1.稱量40.8g naac·3h2o置于100-200ml燒杯中,加入月40ml的去離子水?dāng)嚢枞芙?br>2.加入冰醋酸調(diào)節(jié)ph值至5.2
3.加去離子水將溶液定容至100ml
4高溫高壓滅菌后,室溫保存。
5、pbs buffer
組份濃度:137 mm nacl, 2.7 mm kcl, 10 mm na2hpo4, 2 mm kh2po4
配制量:1 l
配制方法:
1. 稱量下列試劑,置于1 l燒杯中。
nacl 8g
kcl 0.2g
na2hpo4 1.42g
kh2po4 0.27g
2. 向燒杯中加入約800 ml的去離子水,充分?jǐn)嚢枞芙狻?br>3. 滴加濃鹽酸將ph值調(diào)節(jié)至7.4,然后加入去離子水將溶液定容至1 l。
4. 高溫高壓滅菌后,室溫保存。
注意:上述pbs buffer中無(wú)二價(jià)陽(yáng)離子,如需要,可在配方中補(bǔ)充1 mm cacl2和0.5 mm mgcl2。
6、10 m 醋酸銨
組份濃度:10 m 醋酸銨
配制量:100 ml
配制方法:
1. 稱量77.1 g醋酸銨置于100~200 ml燒杯中,加入約30 ml的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?br>2. 加去離子水將溶液定容至100 ml。
3. 使用0.22 mm濾膜過(guò)濾除菌。
4. 密封瓶口于室溫保存。
注意:醋酸銨受熱易分解,所以不能高溫高壓滅菌。
7、苯ben酚/lv仿/yi戊醇 (25 : 24 : 1)
配制方法:
1. 說(shuō)明:從核酸樣品中除去蛋白質(zhì)時(shí)常常使用苯ben酚/lv仿/yi戊醇(25 : 24 : 1)。lv仿可使蛋白質(zhì)變性并有助于液相與有機(jī)相的分離,而異戊醇則有助于消除抽提過(guò)程中出現(xiàn)的氣泡。
2. 配制方法:將tris-hcl平衡ben酚與等體積的lv仿/yi戊醇(24 : 1)混合均勻后,移入棕色玻璃瓶中4℃保存。
8、10% (w/v) sds
組份濃度:10% (w/v)sds
配制量:100ml
配制方法:
1.稱量10g高純度的sds置于100-200ml燒杯中,加入約80ml的去離子水,68℃加入溶解
2.滴加濃鹽酸調(diào)節(jié)ph值至7.2
3.將溶液定容至100ml后,室溫保存。
9、2 n naoh
組份濃度:2 n naoh
配制量:100 ml
配制方法:
1. 量取80 ml去離子水置于100~200 ml塑料燒杯中(naoh溶解過(guò)程中大量放熱,有可能使玻璃燒杯炸裂)。
2. 稱取8 g naoh小心地逐漸加入到燒杯中,邊加邊攪拌。
3. 待naoh完wan全溶解后,用去離子水將溶液體積定容至100 ml。
4. 將溶液轉(zhuǎn)移至塑料容器中后,室溫保存。
10、2.5 n hcl
組份濃度:2.5 n hcl
配制量:100 ml
配制方法:
1. 在78.4 ml的去離子水中加入21.6 ml的濃鹽酸(11.6 n),均勻混合。
2. 室溫保存。
11、5 m nacl
組份濃度:5 m nacl
配制量:1 l
配制方法:
1. 稱取292.2 g nacl置于1 l燒杯中,加入約800 ml的去離子水后攪拌溶解。
2. 加去離子水將溶液定容至1 l后,適量分成小份。
3. 高溫高壓滅菌后,4℃保存。
12、20% (w/v) glucose
組份濃度:20% (w/v) glucose
配制量:100 ml
配制方法:
1. 稱取20 g glucose置于100~200 ml燒杯中,加入約80 ml的去離子水后,攪拌溶解。
2. 加去離子水將溶液定容至100 ml。
3. 高溫高壓滅菌后,4℃保存。
13、solution i(質(zhì)粒提取用)
組份濃度:25 mm tris-hcl(ph8.0), 10 mm edta, 50 mm glucose
配制量:1 l
配制方法:
1. 量取下列溶液,置于1 l燒杯中。
1m tris-hcl(ph8.0) 25ml
0.5m edta(ph8.0) 20ml
20%glucose(1.11m) 45ml
dh2o 910ml
2. 高溫高壓滅菌后,4℃保存。
3. 使用前每50 ml的solution i中加入2 ml的rnase a(20 mg/ml)。
14、solution ii(質(zhì)粒提取用)
組份濃度:200mm naoh,1%(w/v)sds
配制量:500ml
配制方法:
1.量取下列溶液,置于500ml燒杯中
10% sds 50ml
2n naoh 50ml
2.加滅菌水定容至500ml,充分混勻
3.室溫保存,此溶液保存時(shí)間最好不要超過(guò)一個(gè)月
注意:sds易產(chǎn)生氣泡,不要?jiǎng)×覕嚢?br>15、solution iii(質(zhì)粒提取用)
組份濃度:3 m koac, 5 m ch3cooh
配制量:500 ml
配制方法:
1. 稱量下列試劑,置于500 ml燒杯中。
koac 147g
ch3cooh 57.5ml
2. 加入300 ml去離子水后攪拌溶解。
3. 加去離子水將溶液定容至500 ml。
4. 高溫高壓滅菌后,4℃保存。
16、0.5 m edta(ph8.0)
組份濃度:0.5 m edta
配制量:1 l
配制方法:
稱取186.1 g na2edta·2h2o,置于1 l燒杯中。
2. 加入約800 ml的去離子水,充分?jǐn)嚢琛?br>3. 用naoh調(diào)節(jié)ph值至8.0(約20 g naoh)。
注意:ph值至8.0時(shí),edta才能完wan全溶解。
4. 加去離子水將溶液定容至1 l。
5. 適量分成小份后,高溫高壓滅菌。
6. 室溫保存。
17、1 m dtt
組份濃度:1 m dtt
配制量:20 ml
配制方法:
1. 稱取3.09 g dtt,加入到50 ml塑料離心管內(nèi)。
2. 加20 ml的0.01 m naoac(ph5.2),溶解后使用0.22 mm濾器過(guò)濾除菌。
3. 適量分成小份后,-20℃保存。
18、10 mm atp
組份濃度:10 mm atp
配制量:20 ml
配制方法:
1. 稱取121 mg na2atp·3h2o,加入到50 ml塑料離心管內(nèi)。
2. 加20 ml的25 mm tris-hcl(ph8.0),攪拌溶解。
3. 適量分成小份后,-20℃保存。