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        菌種保存的常見(jiàn)問(wèn)題答疑

        發(fā)布時(shí)間:2024-10-05
        1、菌種保存管能保存霉菌及酵母菌嗎?
        答:可以。對(duì)于霉菌等真菌需培養(yǎng)7 天進(jìn)行保存,而酵母菌需培養(yǎng)三天將孢子洗脫下來(lái)進(jìn)行保存,保存管中的小瓷珠可以作為介質(zhì)來(lái)吸附孢子和菌絲,相當(dāng)于砂土保存法中砂土作為載體起到的作用。
        2、所有的菌都能保存嗎?如果不是的話,什么樣的菌可以保存?什么樣的菌不可以保存?
        答:可以。菌種保存的原理是預(yù)防或減緩dna 復(fù)制時(shí)自發(fā)突變導(dǎo)致菌種退化,因此要?jiǎng)?chuàng)造代謝不活潑的狀態(tài),而菌種保存時(shí)使菌種進(jìn)入休眠態(tài)(孢子、芽孢),并創(chuàng)造干燥、低溫、缺氧、缺營(yíng)養(yǎng)的環(huán)境,創(chuàng)造的環(huán)境越接近此狀態(tài),所保存的菌種的時(shí)間就越長(zhǎng),所以從原理上講,所有菌種都可用這種方法保存, 但需要注意的是,苛刻菌(如流感嗜血桿菌、腦膜炎萘瑟氏菌)等特殊細(xì)菌保存時(shí),需-80℃或更低溫度保存,才可以做到更長(zhǎng)期的保存。
        3、能用菌種保存管一直保存菌株嗎?
        答:溫度越低,保藏效果越好。從目前的試驗(yàn)數(shù)據(jù)及實(shí)際保存效果來(lái)看,-20℃可保存1-5 年,-80℃或液氮中可保存5-10 年,不同菌種及不同的保存溫度保存時(shí)間會(huì)有所不同(例如:大腸、沙門等常規(guī)細(xì)菌-20℃我們目前可以保存到6年)。但需要注意的是所保存的菌種需每年抽檢進(jìn)行生化特征的鑒定,確定菌株無(wú)變異。
        4、菌種保藏時(shí)為什么要進(jìn)行分離純化?
        答:分離純化后才能獲得單一菌株,單一菌株進(jìn)行菌種保藏才有意義,防止菌種交叉污染和變異,這也是菌種保存的基本原則。
        5、菌種保存管對(duì)于平板來(lái)說(shuō),對(duì)挑選菌落個(gè)數(shù)有要求嗎?還是將整個(gè)平板的菌落全部刮入管中?
        答:對(duì)于要保存的細(xì)菌一般是要進(jìn)行2-3 次的純化,要保證一個(gè)平板上的菌是由單一菌落傳代而來(lái)的,所以在細(xì)菌保存的過(guò)程中,為了保證制備的菌懸液可以達(dá)到3-4mcf,是可以將整個(gè)平板的的細(xì)菌全部刮到管中的,如果平板長(zhǎng)的比較滿一般半個(gè)平板就夠用,具體用量也根據(jù)菌種的不同有所差異,如霉菌、酵母菌在保存時(shí),不適合用濁度法。
        6、對(duì)于液體培養(yǎng)基培養(yǎng)的純菌,是否也可以用咱們的菌種保存管?如果可以的話,怎么操作?
        答:是可以用的,如果液體培養(yǎng)基能保證是純菌的話,可以直接離心,棄掉上清,然后把保存管中液體吸進(jìn)去充分混勻,然后再轉(zhuǎn)移到菌種保存管中,整個(gè)過(guò)程要注意無(wú)菌操作。不過(guò),一般菌種保存管選擇平板菌落進(jìn)行保存,因?yàn)橐后w培養(yǎng)基中有雜菌是不易觀察出來(lái)的。
        7、為什么在菌種保存時(shí),要上下顛倒?為什么不能旋搖?
        答:上下顛倒,可使菌懸液充分混勻,菌株充分、均勻地吸附到小瓷珠上,旋搖不利于菌懸液充分混勻,反而會(huì)使菌株全部沉淀于管底。
        8、為什么在使用時(shí)要將管內(nèi)的液體盡可能多的吸出?
        答:吸出液體可避免反復(fù)凍融形成的冰晶對(duì)菌株的損傷,加快復(fù)蘇的過(guò)程,因此,要盡可能的將與菌種混勻后的保存液吸凈。而常用的甘油法,在復(fù)蘇的過(guò)程中需用水浴鍋快速溶解,在此過(guò)程中,對(duì)菌株傷害較大。
        9、在使用后,菌種保存管的保存環(huán)境?需要-80℃冰箱嗎?
        答:本公司菌種保存管采用的是低溫冷凍保存法,因此,使用后,需放置低溫環(huán)境,如-20℃的低溫培養(yǎng)箱、-80℃或液氮中保存,而且溫度越低,保存效果越好。用戶需根據(jù)菌種的保存要求選擇具體保存溫度。
        10、為什么說(shuō),如果有條件的話,菌種保存管置于-80冰箱或液氮中?
        答:因?yàn)?,貯存在-70℃以下低溫中能減少冰晶形成,可極大降低冰晶形成對(duì)細(xì)菌的傷害,同時(shí)可為被保存的菌種創(chuàng)造更低的代謝環(huán)境,從而延長(zhǎng)細(xì)菌保存的時(shí)間。
        11、為什么在取用菌株時(shí),操作過(guò)程要求快速?
        答:菌種保存復(fù)蘇的原則,要求慢凍快融,之所以要求快速,是因?yàn)樵诰N復(fù)蘇的過(guò)程中, 長(zhǎng)時(shí)間的溶解過(guò)程會(huì)對(duì)所保存的菌種造成損傷,而我們經(jīng)過(guò)改良的保存方法大程度的避免復(fù)蘇所造成的影響,但我們還是建議遵循菌種的保存復(fù)蘇原則,保證所復(fù)蘇菌種的復(fù)蘇率。
        12、將菌株反復(fù)凍存,到底對(duì)菌株有什么影響?
        答:低溫會(huì)使菌株細(xì)胞內(nèi)的水分形成冰晶,從而引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)尤其是細(xì)胞膜的損傷。細(xì)胞體積大者一般要比較小者對(duì)低溫更為敏感,而無(wú)細(xì)胞壁者則比有細(xì)胞壁者敏感。如果放到低溫(不是一般冰箱)進(jìn)行冷凍時(shí),會(huì)產(chǎn)生冰晶,冰晶呈針狀,極易導(dǎo)致細(xì)菌的嚴(yán)重?fù)p傷。用電鏡觀察,可見(jiàn)細(xì)菌的核膜上有大量針尖樣小孔,當(dāng)從低溫下移出并開(kāi)始升溫時(shí),冰晶又會(huì)變大,故反復(fù)凍存,會(huì)對(duì)菌株造成極大損傷。
        13、為什么有時(shí)候菌種的保存效果不佳?
        答:1、可能是由于保存后未將保存液吸盡,反復(fù)凍融形成冰晶損傷菌株細(xì)胞,影響了菌株活性。
        2、確定所保存的菌種是否為對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的菌種,我們建議普通菌種保存為18小時(shí)內(nèi)的新鮮菌種,而霉菌需要待孢子出現(xiàn)后保存其孢子。
        14、該產(chǎn)品能否用于菌種的運(yùn)送,如果可以在什么條件下運(yùn)送?
        答:就目前試驗(yàn)數(shù)據(jù)而言,我們建議可主要用于普通細(xì)菌的短期運(yùn)送,對(duì)于厭氧菌在運(yùn)送時(shí)讓其處于厭氧環(huán)境下如:厭氧培養(yǎng)箱,2-8℃運(yùn)送不超過(guò)5 天。另外需要說(shuō)明的是如弧菌屬和綠膿桿菌需要常溫運(yùn)送,其對(duì)2-8℃溫度極其敏感。
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