報(bào)告基因是一類使表達(dá)產(chǎn)物易于被檢測(cè)的基因,其作用原理是將報(bào)告基因的編碼序列及其表達(dá)調(diào)控序列與目的基因融合形成嵌合基因,在調(diào)控序列的作用下進(jìn)行表達(dá),通過(guò)對(duì)報(bào)告基因表達(dá)產(chǎn)物的檢測(cè)來(lái)評(píng)價(jià)目的基因的表達(dá)狀況。常見(jiàn)的報(bào)告基因包括螢光素酶(luciferase)、氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶(cat)、β-半乳糖苷酶(β-gal)、分泌性人胎盤(pán)堿性磷酸酶(seap)和綠色熒光蛋白(gfp)等。
螢光素酶（luciferase）是一類在生物體內(nèi)能夠催化熒光素或脂肪醛氧化發(fā)光的酶,從自然界能夠發(fā)光的生物體內(nèi)分離獲得。由于特異性強(qiáng)、靈敏度高、內(nèi)源性低、檢測(cè)不受細(xì)胞內(nèi)其他物質(zhì)的影響等優(yōu)點(diǎn),螢光素酶被作為報(bào)告基因（標(biāo)記蛋白）而被廣泛應(yīng)用。
雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)在單螢光素酶報(bào)告基因的基礎(chǔ)上引入了“內(nèi)參對(duì)照”報(bào)告基因，這樣可以在大程度上減小細(xì)胞數(shù)目、細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)和轉(zhuǎn)染效率等外在因素對(duì)于實(shí)驗(yàn)的影響，使得實(shí)驗(yàn)結(jié)果更為可信。
本期小愛(ài)給大伙帶來(lái)一款愛(ài)必信爆款雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒：雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒（abs60341）。
表1 雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒（abs60341）
組分 名稱 100t 1000t
a 5× passive luciferase lysis buffer 10ml 100ml
b firefly luciferase assay buffer 10ml 100ml
c d-luciferin 2mg 20mg
d renilla luciferase assay buffer 10ml 100ml
e 50×coelenterazine 200ul 2×1ml
產(chǎn)品特點(diǎn)：
產(chǎn)品介紹：
本試劑盒先以螢光素（luciferin）為底物來(lái)檢測(cè)螢火蟲(chóng)螢光素酶的活性，然后加入抑制螢火蟲(chóng)螢光素酶催化的物質(zhì)，同時(shí)加入腔腸素（coelenterazine）檢測(cè)海腎螢光素酶的活性，實(shí)現(xiàn)雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)。適用于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)、需要共報(bào)告基因建立內(nèi)參或?qū)崿F(xiàn)多重信號(hào)、需要報(bào)告基因減弱的情況如研究負(fù)調(diào)控對(duì)刺激產(chǎn)生的細(xì)胞反應(yīng)、實(shí)現(xiàn)較高檢測(cè)精度等情況。
圖1 雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)流程
應(yīng)用：
雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒是一款應(yīng)用廣泛的科研工具，現(xiàn)舉例跟大家詳細(xì)介紹下常見(jiàn)的螢光素酶報(bào)告基因的應(yīng)用。
應(yīng)用1：順式作用原件研究
**表示差異極顯著（p<0.01），* 表示差異顯著（p<0.05）
圖2 雞骨形態(tài)生成蛋白15（bone morphogenetic protein 15, bmp15）基因不同啟動(dòng)子截短體報(bào)告載體的雙螢光報(bào)告結(jié)果
雞骨形態(tài)生成蛋白15（bone morphogenetic protein 15, bmp15）基因不同啟動(dòng)子截短體報(bào)告載體的雙螢光報(bào)告結(jié)果顯示，bmp15 基因啟動(dòng)子-153-1 bp 為核心區(qū)域。
應(yīng)用2：細(xì)胞信號(hào)通路研究
圖3檢測(cè)不同濃度的hly78系列衍生物對(duì)wnt信號(hào)通路報(bào)告基因topflash的螢光素酶活性影響
通過(guò)檢測(cè)不同濃度的hly78系列衍生物對(duì)wnt信號(hào)通路報(bào)告基因topflash的螢光素酶活性影響，篩選出hly78和hly119對(duì)wnt信號(hào)通路有抑制作用。
應(yīng)用3：反式作用因子研究
圖4 在-562- -200位點(diǎn)是runx1 發(fā)揮對(duì)mrgprd 基因的轉(zhuǎn)錄激活的關(guān)鍵位點(diǎn)
圖5 runx1 通過(guò)+70 ～ +143 位點(diǎn)序列促進(jìn)mrgprd 基因轉(zhuǎn)錄
runx1（轉(zhuǎn)錄因子）對(duì)mrgprd 基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制可能有多種，并非只是通過(guò)結(jié)合在mrgprd 基因上游的結(jié)合位點(diǎn)來(lái)直接調(diào)控其轉(zhuǎn)錄。
應(yīng)用4：mirna靶點(diǎn)研究
圖6 mirna靶點(diǎn)研究案例
mir-1269b過(guò)表達(dá)可明顯降低293t細(xì)胞中mettl3-wt的螢光素酶活性，但對(duì)mettl3-mut的活性沒(méi)有顯著影響，表明mir-1269b可靶向mettl3 3’utr，負(fù)調(diào)控gc細(xì)胞中mettl3的表達(dá)。
注：應(yīng)用數(shù)據(jù)均來(lái)自文獻(xiàn)
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：
圖7 abisn雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒與市面上同類產(chǎn)品對(duì)比結(jié)果
使用愛(ài)必信雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒（abs60341）與市面上的同類產(chǎn)品進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)螢火蟲(chóng)螢光素酶與海腎螢光素酶比值與國(guó)外名品牌同類產(chǎn)品最為接近。
最后，跟大家透漏個(gè)好消息：雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒（abs60341）本月優(yōu)惠！
本期搭檔產(chǎn)品推薦：
貨號(hào) 產(chǎn)品名稱 規(guī)格 產(chǎn)品特點(diǎn)
abs60322 lipofect5000 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑 0.5ml/1.0ml 高效轉(zhuǎn)染
低毒性
操作簡(jiǎn)單
abs60327 sp懸浮細(xì)胞質(zhì)粒dna轉(zhuǎn)染試劑 0.5ml/1.0ml/1.5ml
abs60255 質(zhì)粒dna轉(zhuǎn)染試劑盒（貼壁細(xì)胞） 0.5ml/1.0ml/1.5ml
abs60256 pm原代細(xì)胞質(zhì)粒dna轉(zhuǎn)染試劑盒 0.5ml/1.0ml/1.5ml
abs60369 rf 293細(xì)胞dna轉(zhuǎn)染試劑盒 0.5ml/1.5ml
abs60257 溶液a（轉(zhuǎn)染增強(qiáng)劑，僅用于質(zhì)粒dna轉(zhuǎn)染） 0.25ml/0.5ml/1ml
參考文獻(xiàn)：
【1】趙海衛(wèi), 韓佩君, 呂欣, 等. 螢光素酶報(bào)告基因在病毒學(xué)研究中的應(yīng)用[j]. 生物技術(shù)通訊, 2015, 26(1): 131-134.
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