牛（bovine）誘導(dǎo)型no合酶（inos）elisa檢測試劑盒
使用說明書
檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（elisa）。往預(yù)先包被誘導(dǎo)型no合酶（inos）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、hrp標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物tmb顯色，tmb在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的誘導(dǎo)型no合酶（inos）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（od 值），計算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：edta、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1.酶標(biāo)儀（450nm）
2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10ul、2-20ul、20-200ul、200-1000ul
3.37℃恒溫箱
操作注意事項
1.試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。
2.實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
3.濃度為0的s0號標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍，最終結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度。
4.嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
5.所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成
名稱
96孔配置
48孔配置
備注
微孔酶標(biāo)板
12孔×8條
12孔×4條
無
標(biāo)準(zhǔn)品
0.3ml*6管
0.3ml*6管
無
樣本稀釋液
6ml
3ml
無
檢測抗體-hrp
10ml
5ml
無
20×洗滌緩沖液
25ml
15ml
按說明書進行稀釋
底物a
6ml
3ml
無
底物b
6ml
3ml
無
終止液
6ml
3ml
無
封板膜
2張
2張
無
說明書
1份
1份
無
自封袋
1個
1個
無
注：標(biāo)準(zhǔn)品（s0-s5）濃度依次為：0、0.5、1、2、4、8 ng/ml
試劑的準(zhǔn)備
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。
洗板方法
1.手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。
2.自動洗板機：每孔注入洗液350μl，浸泡1min，洗板5次。
操作步驟
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μl；
3.樣本孔先加待測樣本10μl，再加樣本稀釋液40μl；空白孔不加。
4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（hrp）標(biāo)記的檢測抗體100μl，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6.每孔加入底物a、b各50μl，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μl，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的od值。
結(jié)果判斷
繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對應(yīng)od值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。
試劑盒性能
1.準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)r值，大于等于0.9900。
2.靈敏度：最di檢測濃度小于0.1 ng/ml。
3.特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
4.重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
5.貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
6.有效期：6個月
從2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實驗外包及論文潤色服務(wù)，協(xié)助客戶各類實驗服務(wù)及論文潤色十余年，是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!
如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究，歡迎您與我們聯(lián)系。
實驗代做服務(wù)：
elisa試劑盒免費代檢測
cck8檢測
he染色
蛋白相互作用分析
western blot
免疫組化ihc染色
熒光定量pcr
動物模型服務(wù)
流式細胞檢測
免疫熒光染色
激光共聚焦
dna甲基化實驗
石蠟/冰凍切片
透射電鏡服務(wù)
掃描電鏡實驗
蛋白雙向(2-d)
瓊脂糖凝膠電泳
免疫共沉淀
原位雜交（fish）
蛋白質(zhì)純化
分子克隆和質(zhì)粒載體構(gòu)建服務(wù)
組蛋白甲基化磷酸化乙?；?br>蛋白雙向2d-wb
藥理毒理動物實驗
番紅o固綠染色
明膠酶譜mmp
酶活性檢測
動物造模/模型實驗服務(wù)
針對在職或?qū)Ｂ毰R床研究生、博士生實驗室條件的不完備、臨床工作繁忙科研時間嚴(yán)重不足或地市級三級醫(yī)院科室主任、主任醫(yī)師、主治醫(yī)師等公務(wù)繁忙、無精力、時間查找文獻、科研圈子氛圍不夠濃厚、晉升、晉職需要。我公司可根據(jù)客戶研究方向、基金標(biāo)書、實驗課題外包目標(biāo)和要求，實驗預(yù)算等設(shè)計可操作執(zhí)行的詳細實驗方案。
從2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實驗外包及論文潤色服務(wù)，協(xié)助客戶各類實驗服務(wù)及論文潤色十余年，是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!
如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究，歡迎您與我們聯(lián)系。