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        StemRD生長(zhǎng)分化因子樣本處理及要求

        發(fā)布時(shí)間:2024-08-11
        stemrd生長(zhǎng)分化因子是一種共價(jià)結(jié)合*的分泌性蛋白,在動(dòng)物發(fā)育中起重要作用。果蠅的該基因突變導(dǎo)致幼蟲(chóng)體表出現(xiàn)許多刺突,形似刺猬,故名hedgehog。脊椎動(dòng)物中至少有3個(gè)基因編碼hedgehog蛋白,即:shh(sonic hedgehog)、ihh(indian hedgehog)和dhh(desert hedgehog)。hedgehog(hh)信號(hào)通路調(diào)節(jié)胚胎發(fā)育和成體許多組織器官干細(xì)胞的自我更新與增殖。然而,那些在正常發(fā)育過(guò)程中受到hh信號(hào)通路調(diào)節(jié)的組織器官
        stemrd生長(zhǎng)分化因子樣本處理及要求:
        1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
        2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇edta或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。
        3. 尿液:用無(wú)菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
        4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用pbs(ph7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
        5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱(chēng)取重量。加入一定量的pbs,ph7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的pbs(ph7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。
        6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
        7. 不能檢測(cè)含nan3的樣品,因nan3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(hrp)活性。
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