疏水色譜是利用樣品分子與固定相的疏水力作用的不同，用流動(dòng)相洗脫時(shí)，各組分遷移速度不同而達(dá)到分離的目的，主要分離對(duì)象是蛋白質(zhì)。疏水作用色譜固定相的非極性比較弱，流動(dòng)相多采用高濃度鹽緩沖液進(jìn)行梯度洗脫。溫和的分離條件，可以避免反相色譜中由于固定相較強(qiáng)的疏水性和有機(jī)流動(dòng)相引起蛋白質(zhì)的不可逆吸附和變性，因此特別適用于活性物質(zhì)的分離與純化。
疏水色譜的幾個(gè)影響因素介紹：
1、鹽類和鹽組成
鹽的摩爾表面張力增大，蛋白質(zhì)在疏水層析柱內(nèi)的吸附能力相應(yīng)增大。各種鹽離子和離子對(duì)具有破壞周圍水分子有序排列的能力。 流動(dòng)相中鹽的組成對(duì)蛋白質(zhì)在疏水層析介質(zhì)上的吸附能力具有zui為重大的影響。選擇合適的鹽對(duì)保證蛋白質(zhì)的分離以及分離后蛋白質(zhì)的活性都很重要。
2、離子強(qiáng)度
離子強(qiáng)度的大小直接影響樣品組分在固定相的保留值。一般增加離子強(qiáng)度來(lái)增加組分的保留值，降低離子強(qiáng)度來(lái)提高組分的解析附能力。
3、溶液的酸堿度
溶液的ph值主要考慮能維持生物大分子生物活性的ph環(huán)境。一般情況，溶液的ph接近蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)，其疏水性增加，有利于與固定相配基相互作用；遠(yuǎn)離其等電點(diǎn)，其疏水性減少，不利于與固定相配基結(jié)合，但有利于蛋白質(zhì)洗脫。因此通過(guò)改變?nèi)芤旱膒h也可以改變蛋白質(zhì)的疏水性。
4、柱溫
一般柱溫升高，生物大分子的構(gòu)象會(huì)發(fā)生變化，疏水作用增加，吸附能力增加，有利于提高層析柱的分離度，所以有時(shí)可以通過(guò)提高柱溫來(lái)增加疏水基團(tuán)與配基間的相互作用，分離性質(zhì)相近的化合物，如對(duì)分離一些小分子是非常有效的。但是對(duì)于具有生物活性的物質(zhì)或酶類，在高溫條件下易變性失活，因此不宜在高溫條件下進(jìn)行分離。一般都在常溫或低溫下操作。