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        生物傳感器的工作管理及特點分析

        發(fā)布時間:2024-08-18
        根據(jù)生物傳感器中分子識別元件即敏感元件可分為五類:酶傳感器、微生物傳感器、細(xì)胞傳感器、組織傳感器和免疫傳感器。顯而易見,所應(yīng)用的敏感材料依次為酶、微生物個體、細(xì)胞器、動植物組織、抗原和抗體。
        根據(jù)生物傳感器的換能器即信號轉(zhuǎn)換器,分類有:生物電極傳感器、半導(dǎo)體生物傳感器、光生物傳感器、熱生物傳感器、壓電晶體生物傳感器等;換能器依次為電化學(xué)電極、半導(dǎo)體、光電轉(zhuǎn)換器、熱敏電阻、壓電晶體等。
        此外,還有以被測目標(biāo)與分子識別元件的相互作用方式進(jìn)行分類的生物親合型生物傳感器。
        生物傳感器基本結(jié)構(gòu)和工作原理
        生物傳感器由分子識別部分(敏感元件)和轉(zhuǎn)換部分(換能器)構(gòu)成,以分子識別部分去識別被測目標(biāo),是可以引起某種物理變化或化學(xué)變化的主要功能元件。分子識別部分是生物傳感器選擇性測定的基礎(chǔ)。
        生物體中能夠選擇性地分辨特定特質(zhì)的物質(zhì)有酶、抗體、組織、細(xì)胞等。這些分子識別功能物質(zhì)通過識別過程可與被測目標(biāo)結(jié)合成復(fù)合物,如抗體和抗原的結(jié)合、酶與基質(zhì)的結(jié)合。在設(shè)計生物傳感器時,選擇適合于測定對象的識別功能物質(zhì),是極為重要的前提;要考慮到所產(chǎn)生的復(fù)合物的特性。根據(jù)分子識別功能物質(zhì)制備的敏感元件所引起的化學(xué)變化或物理變化,去選擇換能器,是研制高質(zhì)量生物傳感器的另一重要環(huán)節(jié)。敏感元件中光、熱、化學(xué)物質(zhì)的生成或消耗會產(chǎn)生相應(yīng)的變化量。根據(jù)這些變化量,可以選擇適光的換能器。
        生物化學(xué)反應(yīng)過程產(chǎn)生的信息是多元化的,微電子學(xué)和現(xiàn)代傳感技術(shù)的成果為檢測這些信息提供了豐富的手段。
        bod生物傳感器
        bod標(biāo)準(zhǔn)稀釋法是水體有機污染的常規(guī)監(jiān)測方法之一。它需要將含有微生物的水樣在20℃培養(yǎng)5天,需要熟練的操作技巧,操作過程繁瑣,不能及時反映水質(zhì)情況。為了簡單、快速地測定bod,產(chǎn)生了bod生物傳感器,以代替標(biāo)準(zhǔn)稀釋法。
        bod生物傳感器使用的微生物可以是絲孢酵母。菌體吸附在多孔膜上,室溫下干燥后保存待用。將帶有菌體的多孔膜置于氧電極的teflon膜上,使菌體處于兩層膜之間。測量系統(tǒng)包括:帶有夾套的流通池(直徑1.7cm,高0.6cm,體積1.4ml),生物傳感器探頭安裝在流通池內(nèi);蠕動泵;自動采樣器和記錄儀。
        流通池夾套中水溫恒定于30℃±0.2℃,向流通池中注入氧飽和的磷酸鹽緩沖液(ph7.0,0.1mol/l),流量為1ml/min。電流顯示達(dá)穩(wěn)態(tài)值后,以0.2ml/min的流量向流通池注入樣品溶液,每隔60min注入樣品一次。
        將含有葡萄糖和谷氨酸的標(biāo)準(zhǔn)bod樣品溶液注入測量系統(tǒng)時,這些有機化合物透過多孔性膜被固定化的微生物所利用。固定化微生物開始消耗氧,引起膜附近溶液的溶解氧含量減少。結(jié)果,氧電極輸出電流隨時間明顯減小,18min內(nèi)達(dá)到某一穩(wěn)態(tài)值,此時氧分子向膜內(nèi)的擴散和細(xì)胞呼吸之間建立了新的耗氧與供氧的動力學(xué)平衡。
        穩(wěn)態(tài)電流值的大小取決于樣品溶液的bod濃度。樣品溶液流過之后,再將緩沖液通入流通池,使傳感器的輸出電流值恢復(fù)到初始水平。生物傳感器的響應(yīng)時間(達(dá)到穩(wěn)態(tài)電流所需的時間)視樣品溶液的種類而異。對含有乙酸的樣品溶液,響應(yīng)時間為8min;對含有葡萄糖的樣品溶液,響應(yīng)時間為18min。因此,實驗中注入樣品的時間采用20min。
        該生物傳感器的電流差值(初始電流和穩(wěn)態(tài)電流之差)與五天標(biāo)準(zhǔn)稀釋法測得的bod濃度之間呈線性關(guān)系。bod檢測濃度最低值為3mg/l。在bod含量為40mg/l時,10次實驗中電流差值可以重現(xiàn)(相對誤差在±6%以內(nèi))。
        測定氨生物傳感器
        由固定化硝化細(xì)菌、聚四氟乙稀透氣膜和氧電極所構(gòu)成的生物傳感器可用于氨的測定。從活性污泥中分離出的硝化細(xì)菌,包括亞硝化單胞細(xì)菌和硝化桿菌,被吸附固定在多孔膜上(孔徑0.45μm,厚度150μm),把這種載菌膜裝在氧電極端部,再在菌膜上覆蓋一層透氣膜就制成了氨生物傳感器,硝化細(xì)菌以氨為唯一能源消耗氧。
        氨的濃度可通過檢測氧電極上的固定化微生物的耗氧量來測定。測定在ph9.0,溫度30℃下進(jìn)行。電流降低值(初始電流值與穩(wěn)態(tài)電流值之差)與氨濃度之間呈線性關(guān)系。檢測最大濃度為42mg/l,最大電流降低值是4.7μa,檢測下限為0.1 mg/l,(重現(xiàn)性為±5%)。對各種揮發(fā)性物質(zhì)(如醋酸、乙醇、二甲胺、丁胺等)無響應(yīng),表明傳感器選擇性極好。對33 mg/l氨樣品測定,傳感器輸出電流在長達(dá)兩周或者1500次以上的測定中幾乎不變。對人尿中的氨進(jìn)行測定,生物傳感器法與氨電極法相關(guān)系數(shù)為0.9,該生物傳感器已用于測定發(fā)酵廠排出液中的氨。
        亞硝酸鹽生物傳感器
        硝化細(xì)菌利用亞硝酸鹽作為唯一能源,進(jìn)行呼吸作用耗氧,反應(yīng)過程如下:
        使用由固定化硝化細(xì)菌和氧電極構(gòu)成的生物傳感器可以測定亞硝酸鹽。
        帶有固定化硝化細(xì)菌的多孔性膜切成圓片,并小心地貼在氧電極表面的teflon膜上,然后再蓋上一層透氣膜( 0.5μm孔徑)并用橡膠環(huán)固定好,即可制成亞硝酸鹽傳感器探頭,它的測量系統(tǒng)包括:帶夾套的流通池(直徑23mm,高10mm,液體體積lml ),生物傳感器探頭置于其中;蠕動泵;放大器和記錄儀。
        通過水浴使流通池的溫度保持在30℃士1℃。以1.6mi/min的流量將氧飽和的緩中液(ph2.0)輸人流通池,待電極電流達(dá)到某一穩(wěn)態(tài)值后,以0.4ml/min的流量將樣品溶液送人流通池,歷時2min。
        樣品溶液(亞硝酸鈉溶液)送入流通池后,在ph2.0的條件下亞硝酸離子轉(zhuǎn)變成二氧化氮,然后二氧化氮通過透氣膜。在硝化細(xì)菌層內(nèi),二氧化氮又轉(zhuǎn)變成亞硝酸離子。亞硝酸離子被硝化細(xì)菌作為唯一的能源而被代謝。通過氧電極測出細(xì)菌膜附近的溶液的溶解氧消耗,由氧電極的電流降低值可以間接測定亞硝酸鹽的濃度。
        該傳感器的電流隨時間明顯地減小,直到某一穩(wěn)態(tài)值。10min之內(nèi)可得到穩(wěn)態(tài)電流。
        初始電流與穩(wěn)態(tài)電流之差和亞硝酸鹽的濃度(在59mmol/l以下)之間呈線性關(guān)系。亞硝酸鹽的最低檢測濃度為0.lmmol / l。用0.25mmol/l的亞硝酸鈉溶液測定時,25次實驗的標(biāo)準(zhǔn)偏差是0.0lmmol/l,相對誤差±4%。
        溶液中含有各種不同的物質(zhì)并不影響到這種生物傳感器的測量效果。同一濃度樣品,在21天以內(nèi)經(jīng)400次以上重復(fù)測定,傳感器的電流輸出幾乎不變。
        乙醇生物傳感器
        在乙醇氧化酶、水和氧存在的情況下,乙醇被氧化成乙醛和過氧化氫的反應(yīng)過程如下:
        由固定化酶膜和過氧化氫電極可以組合構(gòu)成乙醇生物傳感器。
        將350單位的乙醇氧化酶和1ml的5 % (v/v)的聚乙烯亞胺及3mg牛血清白蛋白溶液混合,并加入0.2ml的15%(v/v)的戊二醛溶液。在5℃存放4小時。再將這種酶的混合物包在聚碳酸脂膜和醋酸纖維素膜之間,并在5℃下風(fēng)干24小時。這些膜再用0.02 % ( v / v)的戊二醛溶液處理,并用磷酸鹽緩沖液(0.05mol / l , ph 7.0)洗滌之后,獲得該傳感器的探頭。它的測量系統(tǒng)主要包括:帶夾套的流通池、蠕動泵、自動進(jìn)樣器、放大器和記錄儀。
        在0一3.0 % ( v / v)濃度范圍內(nèi)觀測到的電流增加值和乙醇濃度呈線性關(guān)系。但在3.0 % ( v / v)濃度以上,是呈非線性的。
        甲烷生物傳感器
        甲烷氧化菌同化甲烷時因呼吸而耗氧,其反應(yīng)式如下:
        制備此傳感器所用細(xì)菌是甲基單胞菌。測量系統(tǒng)包括兩個氧電極、兩個反應(yīng)器、一個電流放大器、兩臺真空泵和一個記錄儀,兩反應(yīng)器容積均為55ml,各含41ml,培養(yǎng)液。一個反應(yīng)器載有細(xì)菌細(xì)胞,另一個反應(yīng)器中沒有細(xì)菌細(xì)胞。把兩支氧電極分別安裝在兩個測量池中,用玻璃管或聚四氟乙烯管把測量池與整個系統(tǒng)連接起來。一個真空泵的用途是抽空管中的氣體,另一個泵的作用是向系統(tǒng)中輸送氣體樣品。整個系統(tǒng)保持嚴(yán)密性,不漏氣,設(shè)計線路保持測量線路和參比線路的對稱性。反應(yīng)池外用恒溫水浴控制在30℃±0.1℃。
        甲烷傳感器測量的是兩個反應(yīng)池中氧電極電流差值,電流值差由含氧量不同而引起。當(dāng)含有甲烷的氣體樣品流過有細(xì)菌的反應(yīng)池時,甲烷被細(xì)菌同化,引起細(xì)菌呼吸性增加,這樣該反應(yīng)池中氧電極電流減少至最低穩(wěn)定狀態(tài)。而另一支氧電極所在的反應(yīng)池中不含有細(xì)菌,氧含量及電流值均不減少,所以兩個電極電流之間的最大差值與氣體樣品中甲烷含量有關(guān)。
        此傳感器系統(tǒng)在甲烷濃度為0一6.6mmol/l范圍內(nèi)與電流差值有良好的線性關(guān)系,電流差值變化范圍是0一3.5μa,可檢測的最低濃度是5μmol/l,測定0.66mmol/l的樣品(25個)時,電流差值的重現(xiàn)性在5%以內(nèi),標(biāo)準(zhǔn)偏差是9.40na。測定甲烷的響應(yīng)時間在60秒內(nèi)恢復(fù)到最初的平衡值,因此,測定一個樣品的總時間是2min。
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