目的:為檢測和定量人血漿中目標(biāo)制劑混合物開發(fā)一種靈敏、耐用和可重現(xiàn)的 lc-ms/ms 分析 方法
前言:在大多數(shù)制藥企業(yè)中,小分子候選藥物作為新化學(xué)實(shí)體或仿制藥,占據(jù)了藥物發(fā)現(xiàn)管道 的大部分比例。目標(biāo)定量分析是工作流程的一個(gè)關(guān)鍵組成部分,其要求成功開發(fā)出 小分子藥物。而這些目標(biāo)定量分析必須在生物基質(zhì)中完成,因此,常常帶來分析挑戰(zhàn)。 在本項(xiàng)研究中,我們報(bào)道了為大鼠血漿中多個(gè)藥物標(biāo)準(zhǔn)品開發(fā)的靈敏、耐用、可靠和可 重現(xiàn)的 lc-ms/ms 分析方法。
實(shí)驗(yàn):樣品制備 采用乙腈(acn): 血漿 =3:1 破壞血漿,從而制備已破壞的血漿 儲(chǔ)備液。將制備的溶液在 10,000 rpm 下離心 10 分鐘。去除上 清液,并加入等體積的水,終得到已破壞血漿的儲(chǔ)備原液。 將已破壞血漿儲(chǔ)備混合液中每種標(biāo)準(zhǔn)化合物濃度為 1 mg/ml 的 儲(chǔ)備液稀釋至
1 pg/ml–25,000 pg/ml 和 10 pg/ml-100,000 pg/ml。將同位 素標(biāo)記的內(nèi)標(biāo)化合物加入到每個(gè)校正水平上,從而得到終濃 度為 0.5ng/ml 的內(nèi)標(biāo)溶液。所有試劑均購自 cerilliant 公司(朗 德羅克,得克薩斯州),濃度為 1 mg/ml 的甲醇溶液。
液相色譜法:采用 thermo scientifictm vanquishtm horizon hplc 系統(tǒng) 進(jìn)行色譜分離。所使用的色譜柱為 thermo scientifictm hypersil goldtm aq c18 極性封端 lc 色譜柱(100 × 2.1 mm,1.9 µm 粒徑)。流動(dòng)相 a 和 b 分別為 10 mm 甲 酸銨水溶液(采用 fisher chemicaltm optimatm 級(jí)純水) 和 0.1% 甲酸乙腈溶液。柱溫為 50 ℃。總運(yùn)行時(shí)間為 3.5 分鐘(表 1)。
質(zhì)譜分析法 采用 thermo scientifictm tsq altistm 三重四極桿質(zhì)譜儀進(jìn)行質(zhì) 譜分析,配置 thermo scientifictm optamaxtm ng 離子源室。 表 2 和表 3 顯示了實(shí)驗(yàn)設(shè)置中使用的質(zhì)譜儀離子源和 srm 參 數(shù)。
數(shù)據(jù)分析 采用 thermo scientifictm tracefindertm 軟件采集并處理數(shù)據(jù)。
結(jié)果與討論:研究發(fā)現(xiàn),采用 tsq altis ms 測得的每個(gè)候選藥物的定量下限 (lloq)明顯低于采用以前幾代 ms 系統(tǒng)的測量值(表 4)。 此外,內(nèi)標(biāo)化合物的 %cv 值顯著降低也意味著 tsq altis 質(zhì)譜 的耐用性和重現(xiàn)性更優(yōu)。300 pg/ml qc 2 的典型色譜圖見圖 1。 qc 線性和重現(xiàn)性的更多詳細(xì)信息見表 5