什么是抗體純化？
抗體純化是指從抗血清（pab）、腹水或雜交瘤細(xì)胞系（mab）細(xì)胞培養(yǎng)上清液中提取抗體的過程。純化后的抗體適用于多種應(yīng)用。該過程可以在提供抗體純化服務(wù)的實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行，如果有必需的設(shè)備和工具，也可以自行純化。如研究人員擔(dān)心原始研究的完整性受到破壞，可在實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行純化，確保研究快速進(jìn)行。
抗體的主要來源之一是在動物體內(nèi)生成的抗血清。在這種情況下，反復(fù)向動物體內(nèi)注射抗原，直到抗體開發(fā)完成為止，其血液用于制備抗血清，經(jīng)純化后可獲得多克隆抗體?？贵w的另一個來源是克隆細(xì)胞，其作為相同細(xì)胞群的一部分生成抗體；這種方法用于大規(guī)模生產(chǎn)單克隆抗體。查看更多有關(guān)“單克隆抗體純化”的信息。
抗體純化的基本流程？
①前期準(zhǔn)備
選擇適當(dāng)?shù)膩碓?根據(jù)需要選擇合適的來源,如小鼠、兔子等。
免疫原制備:根據(jù)需要制備相應(yīng)的免疫原。
動物免疫:將免疫原注射到動物體內(nèi)進(jìn)行免疫。
②收集血清
采集血液：在動物免疫后，采集相應(yīng)量的血液
離心分離血清：將采集的血液離心分離出血清。
③初步純化
蛋白a親和層析：將血清通過蛋白a親和層析柱進(jìn)行初步純化。蛋白a是與igg亞類結(jié)合較緊密的親和素。
洗脫：通過改變ph值或鹽濃度等條件，將與蛋白a柱結(jié)合的igg洗脫下來。
④中期純化
離子交換層析：將初步純化后的igg通過離子交換層析柱進(jìn)行中期純化。選擇適當(dāng)?shù)碾x子交換樹脂，使得igg可以被結(jié)合并隨后洗脫。
洗脫：通過改變鹽濃度或ph值等條件，將與離子交換樹脂結(jié)合的igg洗脫下來。
⑤后期純化
凝膠過濾層析：將中期純化后的igg通過凝膠過濾層析柱進(jìn)行后期純化。選擇適當(dāng)?shù)哪z過濾樹脂，使得igg可以在某一分子量范圍內(nèi)被分離出來。
洗脫：將分離出來的igg進(jìn)行洗脫，并進(jìn)行最終檢測。
抗體純化方法？
抗體純化用于從血清中分離多克隆抗體，或從腹水或培養(yǎng)上清液中分離單克隆抗體。我們可以采用多種方法純化抗體，可純化從粗制到具有高度特異性的抗體。
利用制備好的抗原使動物產(chǎn)生免疫反應(yīng)，隨后生成結(jié)合這種抗原的特異性抗體。從血清或雜交瘤細(xì)胞系（從免疫動物組織中制備）中純化的抗體可直接用于（或在用酶或熒光標(biāo)記物標(biāo)記后）蛋白免疫印跡、elisa等抗原檢測及多種其他應(yīng)用。單克隆抗體純化工藝通常涉及捕獲、中間純化和精純等兩步或三步純化方法。
①抗體捕獲方法
因?yàn)榭贵w具有可預(yù)測的結(jié)構(gòu)，包括相對不變的結(jié)構(gòu)域，不管抗體對抗原的特異性如何，都有可能識別出某些能與抗體結(jié)合的蛋白配體。蛋白a、蛋白g和蛋白l是三種細(xì)菌蛋白，具有良好的抗體結(jié)合特性。這些蛋白通過重組制備，通常用于多物種的關(guān)鍵抗體類型的親和純化。這些抗體結(jié)合蛋白可固定在串珠狀瓊脂糖樹脂上。
②抗體精純方法
利用親和層析法的單個快速捕獲步驟足以達(dá)到研究目的所需產(chǎn)品的純度和產(chǎn)品數(shù)量?？贵w或其片段可以充分純化以供進(jìn)一步使用，且精純步驟足以去除多余雜質(zhì)。如果不能使用親和層析法達(dá)到需要的更高純度，則應(yīng)在精純方法中使用其他替代技術(shù)。
離子交換（iex）層析法
離子交換（iex）層析法是根據(jù)電荷分離蛋白質(zhì)的方法?？梢灾苽渖V柱用于陰離子交換或陽離子交換。陰離子交換色譜柱包含帶有正電荷的固定相，可吸引帶有負(fù)電荷的蛋白質(zhì)。陽離子交換色譜柱則相反，帶有負(fù)電荷的串珠可吸引帶正電荷的蛋白質(zhì)。調(diào)整色譜柱中的ph值對目標(biāo)抗體進(jìn)行洗脫，以改變或中和每種蛋白質(zhì)的帶電官能團(tuán)。
凝膠過濾（gf）層析法
凝膠過濾（gf）層析法，也稱為體積排阻色譜法，可從小分子蛋白質(zhì)中分離大分子蛋白質(zhì)，因?yàn)檩^大的分子能夠更快地通過色譜柱中的交聯(lián)聚合物。大分子抗體不適合聚合物的孔，而小分子抗體適合。小分子抗體并不是直接通過色譜柱，需要花費(fèi)更長時間，洗脫液收集在一系列管中，根據(jù)洗脫時間分離抗體。凝膠過濾是濃縮抗體樣本的有效工具，因?yàn)槟繕?biāo)抗體的收集比最初加入色譜柱的洗脫體積更小。由于其成本低廉，在大規(guī)?？贵w制備時可使用同樣的過濾技術(shù)。
疏水相互作用（hic）色譜法
疏水相互作用（hic）色譜法通常在單克隆抗體純化中作為精純步驟。hic為離子交換色譜法提供了正交選擇性，可作為有效步驟用于總間隙和宿主細(xì)胞蛋白制備。hic基于固定相上的疏水（脂族或芳香族）配體與蛋白質(zhì)表面的疏水基團(tuán)之間的相互作用。高離子強(qiáng)度緩沖液增強(qiáng)了這種相互作用，使得hic在用硫酸銨沉淀或iex期間在高鹽中洗脫后成為了jue佳的純化步驟。
抗體純化是制備高質(zhì)量抗體的重要步驟之一。本文介紹了抗體純化的基本流程，包括前期準(zhǔn)備、收集血清、初步純化、中期純化和后期純化等步驟。在實(shí)際操作中，應(yīng)根據(jù)具體情況選擇適當(dāng)?shù)姆椒ê蜅l件，以獲得高純度的抗體。
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