一、 生物學(xué)檢測法
tnf的主要 生物 學(xué)活性之一就是對某些腫瘤細胞的細胞毒作用。根據(jù)這一特點，可利用tnf敏感的靶細胞測定tnf活性，根據(jù)細胞死亡得出tnf的相對活性。該法的關(guān)鍵是選擇敏感特異的靶細胞。靶細胞可以是長期傳代培養(yǎng)的細胞系，也可以是新鮮分離的原代細胞（如瘤細胞）?，F(xiàn)以貼壁生長的l929細胞為例，簡述tnf活性的檢測原則。
兩種tnf均可傷體外培養(yǎng)的l929細胞，細胞死亡率與tnf活性成正比。某些染料如中性紅、結(jié)晶紫等能使活細胞染上相應(yīng)顏色，再用脫色液將染料脫出，通過測定其吸光度值間接監(jiān)沒細胞存活狀態(tài)。
試驗原則是收集對數(shù)生長期的l929細胞，用培養(yǎng)液調(diào)細胞至適當濃度，加入培養(yǎng)板小孔中，置37℃，5％co2 溫箱中培養(yǎng)16～24h，換液后，在各孔中加入不同稀釋度的待檢樣品，再加適當濃度的放線菌素d和適量培養(yǎng)液，繼續(xù)溫育16～24h，棄培養(yǎng)液，經(jīng)hanks液洗滌后，每孔加入適當濃度的結(jié)晶紫染色液，37℃培養(yǎng)1h，使活細胞充分著色。
然后各孔加1％sds短時溫育使染色細胞溶解，再以酶標測定儀測各孔a 570nm 值。每次檢測均設(shè)培養(yǎng)液（陰性）對照和不同濃度的rtnf（陰性）對照。以使陰性對照50％細胞溶解的標本最大稀釋倍數(shù)為tnf活性單位，以u/ml表示。
由于放線菌素d能抑制dna的合成、降低靶細胞對損傷的修復(fù)機制，因而在檢測中加入放線素d可使靶細胞對tnf的敏感性增高10～200倍。
二、免疫學(xué)檢測法
通常采用elisa，該法特異性高、敏感性強且快速使捷，而且能夠區(qū)別tnfα和tnfβ，為臨床檢測病人 血清 中tnf水平的有效方法，但不能反映tnf活性。
三、其它檢測法
檢測tnf還可用生物發(fā)光法及nag微量酶反應(yīng)比色法。這類方法是應(yīng)用生化技術(shù)檢測細胞內(nèi)代謝的變化，從而推知靶細胞功能變化及死亡情況。其優(yōu)點是不僅反映細胞的死亡情況，而且能反映細胞的功能變化。此外，還具有快速、方便、微量的特點。