陰離子交換色譜柱是指離子交換色譜中的固定相中的一些帶電荷的基團(tuán),這些帶電基團(tuán)通過靜電相互作用與帶相反電荷的離子結(jié)合。如果流動相中存在其他帶相反電荷的離子,按照質(zhì)量作用定律,這些離子將與結(jié)合在固定相上的反離子進(jìn)行交換。陰離子交換色譜柱鍵合固定相是以高純度具有良好機(jī)械穩(wěn)定性的硅膠為基質(zhì),通過使用高純度鍵合試劑在硅膠上鍵合季銨強(qiáng)陰離子交換基團(tuán),具有季銨和苯基官能團(tuán)的混合化學(xué)結(jié)構(gòu)。這種強(qiáng)陰離子交換相與疏水相的混合模式可以為各種有機(jī)化合物如芳香族或脂肪族羧酸和磺酸等提供高效和高選擇性的分離。
陰離子交換色譜柱基本原理:
離子交換色譜是蛋白純化技術(shù)中常用的一種純化方法,其原理是指被分離物質(zhì)所帶的電荷可與離子交換劑所帶的相反電荷結(jié)合,這種帶電分子與固定相之間的結(jié)合作用是可逆的,在改變ph或者用逐漸增加離子強(qiáng)度的緩沖液洗脫時(shí),離子交換劑上結(jié)合的物質(zhì)可與洗脫液中的離子發(fā)生交換而被洗脫到溶液中。由于不同物質(zhì)的電荷不同,其與離子交換劑的結(jié)合能力也不同,所以被洗脫到溶液中的順序也不同,從而被分離出來。
陰離子交換色譜柱通常在高壓下運(yùn)行。如果管路連接不緊,將會導(dǎo)致有機(jī)溶劑和注入樣品的泄漏,從而對操作人員的健康產(chǎn)生影響。一旦發(fā)生泄漏,應(yīng)佩戴適當(dāng)?shù)氖痔走M(jìn)行處理。另外當(dāng)打開色譜柱時(shí)還應(yīng)采取適當(dāng)?shù)谋Wo(hù)措施,以防止微小的硅膠顆粒進(jìn)入呼吸道。